Hallo! Ich komme von einem Lieferanten für Chromatographiegeräte und heute möchte ich mich darüber unterhalten, wie die Ionenstärke der mobilen Phase in Chromatographiegeräten kontrolliert werden kann.
Lassen Sie uns zunächst verstehen, warum die Kontrolle der Ionenstärke so wichtig ist. In der Chromatographie spielt die mobile Phase eine entscheidende Rolle bei der Trennung verschiedener Komponenten einer Probe. Die Ionenstärke der mobilen Phase kann die Retentionszeit, die Spitzenform und die Trennungseffizienz der Analyten beeinflussen. Wenn die Ionenstärke zu hoch oder zu niedrig ist, kann sie zu einer schlechten Trennung, breiten Peaks oder sogar zu ungenauen Ergebnissen führen.
Lassen Sie uns nun in das Nitty einsteigen - doch körnig, wie man es kontrolliert.
1. Auswählen des richtigen Puffersystems
Eine der häufigsten Möglichkeiten zur Kontrolle der Ionenstärke ist die Verwendung von Pufferlösungen. Puffer sind Gemische einer schwachen Säure und ihrer konjugierten Base oder einer schwachen Base und ihrer Konjugatsäure. Sie können Veränderungen des pH -Werts widerstehen und dazu beitragen, eine stabile ionische Umgebung aufrechtzuerhalten.
Bei der Auswahl eines Puffer müssen Sie den PKA -Wert berücksichtigen. Die PKA sollte dem gewünschten pH -Wert der mobilen Phase nahe sein. Wenn Sie beispielsweise eine mobile Phase mit einem pH -Wert von etwa 7 wünschen, könnte ein Phosphatpuffer mit einem PKA um 7 eine gute Wahl sein. Sie können die Konzentration des Puffers einstellen, um die Ionenstärke zu kontrollieren. Eine höhere Pufferkonzentration führt im Allgemeinen zu einer höheren Ionenstärke.
Es stehen auch verschiedene Arten von Puffern zur Verfügung, wie Acetat-, Citrat- und Tris -Puffer. Jeder hat seine eigenen Vor- und Nachteile. Acetatpuffer werden häufig in umgekehrter Phasenchromatographie verwendet, da sie relativ flüchtig sind und während der Probenvorbereitung leicht entfernt werden können. Citratpuffer eignen sich gut für Anwendungen, bei denen eine niedrigere Ionenstärke erforderlich ist. TRIS -Puffer werden üblicherweise in der Ionen -Austauschchromatographie verwendet.
2. Salz hinzufügen
Eine andere Möglichkeit, die Ionenstärke zu kontrollieren, besteht darin, die mobile Phase Salz hinzuzufügen. Salze dissoziieren in Lösung in Ionen und erhöhen die Gesamt -Ionenfestigkeit. Zu den in Chromatographie verwendeten häufigen Salzen gehören Natriumchlorid (NaCl), Kaliumchlorid (KCL) und Ammoniumacetat (NH₄ch₃coo).
Die Auswahl des Salzes hängt von mehreren Faktoren ab. Wenn Sie beispielsweise einen Massenspektrometrie -Detektor verwenden, möchten Sie möglicherweise flüchtige Salze wie Ammoniumacetat verwenden, da nicht flüchtige Salze eine Kontamination im Massenspektrometer verursachen können. Die Konzentration des Salzes kann nach der gewünschten Ionenstärke eingestellt werden. Achten Sie jedoch darauf, nicht zu viel Salz hinzuzufügen, da es zu Problemen wie erhöhtem Säulendruck und verringerter Trennungseffizienz führen kann.
3.. Verwenden der Gradientenelution
Die Gradientenelution ist eine Technik, bei der die Zusammensetzung der mobilen Phase im Laufe der Zeit geändert wird. Dies kann verwendet werden, um die Ionenstärke während des Chromatographielaufs zu kontrollieren. Zum Beispiel können Sie mit einer mobilen Phase mit einer niedrigen Ionenstärke beginnen und sie während der Trennung allmählich erhöhen. Dies kann nützlich sein, um komplexe Gemische zu trennen, bei denen verschiedene Analyten unterschiedliche Affinitäten für die stationäre Phase haben.
In der Gradientenelution müssen Sie das Gradientenprofil sorgfältig planen. Sie können einen linearen Gradienten verwenden, bei dem die Ionenstärke mit konstanter Geschwindigkeit oder einem nicht linearen Gradienten zunimmt, wobei sich die Erhöhungsrate im Laufe der Zeit ändert. Die Wahl des Gradientenprofils hängt von der Art der Probe und den Trennanforderungen ab.
4. Verdünnung
Die Verdünnung ist ein einfacher, aber effektiver Weg, um die Ionenstärke zu kontrollieren. Wenn die Ionenstärke Ihrer mobilen Phase zu hoch ist, können Sie sie mit einem geeigneten Lösungsmittel verdünnen. Wenn Sie beispielsweise eine mobile Phase mit einer hohen Salzkonzentration haben, können Sie Wasser oder eine Pufferlösung mit einer niedrigeren Salzkonzentration hinzufügen, um die Ionenfestigkeit zu verringern.
Wenn Sie jedoch die mobile Phase verdünnen, müssen Sie jedoch sicherstellen, dass die Verdünnung den pH -Wert und andere Eigenschaften der mobilen Phase nicht beeinflusst. Möglicherweise müssen Sie auch andere Parameter wie die Durchflussrate und die Säulentemperatur einstellen, um eine gute Trennung beizubehalten.
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Referenzen
- Snyder, LR, Kirkland, JJ & Glajch, JL (1997). Praktische HPLC -Methodenentwicklung. John Wiley & Sons.
- McMaster, MC (2006). Gaschromatographie: Ein praktischer Ansatz. Royal Society of Chemistry.
- Poole, CF (2003). Chromatographie heute. Elsevier.
